六味地黄丸对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用

摘要：目的：探讨六味地黄丸含药血清对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔利用“异常应力负荷及椎间失稳法”建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型。病理切片确认模型成功后，取椎间盘分离下位软骨终板进行细胞培养，将生长良好的细胞随机分为含药组、损伤组与对照组。含药组体积分数为10％的六味地黄丸含药血清加体积分数为10％的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基；损伤组给予体积分数为10％的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基；对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为10％的DMEM培养基。使用细胞增殖-毒性检测试剂盒（ CCk-8）检测各组兔退变椎间盘软骨终板细胞增殖的变化。TUNEL法计数软骨终板活细胞与凋亡细胞数量，RT-PCR测定其Fas/FasL的表达水平。结果对照组软骨终板细胞初期正常生长，增殖良好，随着时间延长，软骨终板细胞数量减少，凋亡细胞数量增多，细胞外基质胶原减少，细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软骨终板细胞的增殖，软骨细胞及细胞外基质胶原数量减少明显，同一时间点比较，软骨细胞凋亡数量增多，与对照组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。而含药组软骨终板细胞增殖缓慢，软骨细胞下降少，细胞凋亡数量减少，细胞外基质胶原成分下降不明显，3组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组软骨终板内Fas/FasL的表达水平随时间逐渐增强，同期比较，损伤组Fas/FasL表达水平高于对照组，而含药组软骨终板水平Fas/FasL较损伤组表达明显下降，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-α诱导的兔退变椎间盘软骨终板细胞损伤，减少软骨细胞凋亡，起到延缓椎间盘损伤的作用，其机制可能与抑制Fas/FasL基因在退变椎间盘软骨终板中的过度表达有关。